1.色譜柱信息

  Inertsil CN-3液相色譜柱是在高純度硅膠基質(zhì)上鍵合氰丙基的色譜柱，可用于正反相分離模式。用于反相分離模式時，由于含有碳氮三鍵，提供π電子作用力，因此具有與C18不同的選擇性，可以用于非極性至極性例如藥物、多肽、氨基酸、核酸和寡糖、有機(jī)酸的分離。Inertsil®CN-3液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成，到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測，都是在本公司嚴(yán)格的產(chǎn)品控制下進(jìn)行，因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性;通過獨(dú)有的裝填技術(shù)填裝的氰基柱柱床密度均一穩(wěn)定，從而確保色譜柱具有高柱效。

  為了能長期保持Inertsil®CN-3液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱，在使用色譜柱之前請仔細(xì)閱讀本說明書。

2.使用前的檢查與須知事項

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝，檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規(guī)格、連接形式是否相符。

●色譜柱中封存流動相為正己烷/乙醇=98:2，v/v。

3.色譜柱填料規(guī)格

4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運(yùn)輸過程中，兩端用堵頭密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時，首先請確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶，請采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑(e.g.異丙醇)對系統(tǒng)進(jìn)行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中，并注意流動相的方向要與柱上標(biāo)記的方向保持一致。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)接頭型式為

1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖)，同時還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP型(如下右圖)(目前CN-3柱暫不提供UPLC柱)。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。

  色譜柱連接好之后，請確認(rèn)無漏液現(xiàn)象之后再進(jìn)行后續(xù)操作。

  新的CN-3柱是保存在正己烷/乙醇(98:2，v/v)的溶液中，在儲存和運(yùn)輸過程中，硅膠填料可能會干涸,如果用于正相分離模式，正相柱的平衡時間一般較長,直接用正己烷/乙醇(98:2，v/v)沖洗50倍柱體積活化，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速，然后用流動相平衡之后再進(jìn)樣分析;如果用在反相系統(tǒng)中分離，推薦用至少50倍柱體積異丙醇過渡(注意接色譜柱之前，用二通代替色譜柱連接系統(tǒng)，用異丙醇將系統(tǒng)包含進(jìn)樣器部分徹底清洗，除水完全之后，再連接色譜柱)，再用純的乙腈沖洗20倍柱體積對色譜柱進(jìn)行平衡，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速，然后用不含緩沖鹽的流動相進(jìn)行平衡20倍柱體積，再用流動相平衡，待壓力和基線穩(wěn)定之后，再進(jìn)樣分析。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時，請及時聯(lián)系我公司工程師處理。)

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞，所有樣品及溶劑，包括緩沖溶液在內(nèi)，在使用前必須用0.45μm或者0.22 μm的濾膜過濾。在正相色譜中，固定相的水分含量常常是影響選擇性的關(guān)鍵因素，大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解水分(正己烷20℃水分含量是0.0111% w/w)，如發(fā)現(xiàn)色譜柱保留性能發(fā)生變化，可用流動相低流速長時間充分平衡。

6.色譜柱的保養(yǎng)

●pH CN-3柱可在pH2~7.5范圍內(nèi)使用，為保持色譜柱良好的壽命，請避免較強(qiáng)的酸或堿性樣品或者流動相進(jìn)入色譜柱。

●耐壓 常規(guī)柱耐受壓力為20MPa，HP系列耐壓為50MPa，但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運(yùn)行會對色譜柱造成難以修復(fù)的損害，因此系統(tǒng)壓力升高之后，建議盡快排查系統(tǒng)，如果是色譜柱壓力升高，請及時采用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱。

●溫度 最高操作溫度為60℃，長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。

●沖洗

  正相模式清洗步驟:1.每次清洗都用低流速起步，當(dāng)檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速;2.先用10倍柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等沖洗色譜柱;3.用50柱體積的諸如乙酸乙酯，二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。

  反相模式清洗步驟:1.如果是采用緩沖鹽流動相的情況下，做樣之前請務(wù)必用比緩沖鹽稍高比例的水充分過渡，然后再用流動相平衡;2.每天做樣完畢之后，應(yīng)充分沖洗色譜柱，首先用稍高比例的水相沖洗，例如乙腈/水=10:90 (v/v)沖洗2o倍柱體積，然后用乙腈/水=95:5(v/v)沖洗20倍柱體積，然后保存在這個流動相下。

●儲存

  色譜柱長期不用，建議沖洗方法完成之后，正相分離模式保存在與出廠封存溶劑相同的流動相中;HILIC 分離模式保存在存純乙腈中，之后卸掉色譜柱，兩端用堵頭密封，并放在溫度變化小的場所。